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Colloquio Hollister di ratto mitocondriale 3 chetoacil CoA tiolasi

Colloquio Hollister

Mitocondriale 3 chetoacil-CoA tiolasi è un enzima chiave per la β-ossidazione degli acidi grassi, e la carenza di questo enzima in pazienti precedentemente riportato. Abbiamo clonato un cDNA di ratto mitocondriale 3 chetoacil-CoA tiolasi in un vettore di espressione batterico pLM1 con sei codoni istidina continue è collegato all'estremità 5 'del gene. Il cDNA clonato è stato sovraespresso in Escherichia coli e Colloquio Hollister la proteina solubile è stata purificata con un chelante del metallo colonna di affinità al nichel Hi-Trappola nel 92% di rendimento per l'omogeneità apparente. L'attività specifica del purificato His-tagged ratto mitocondriale 3 chetoacil-CoA tiolasi era 25 u0026 nbsp; U / mg. È stato proposto che His352 è un residuo catalitico responsabile dell'attivazione del coenzima A da deprotonazione di un gruppo sulfidrilico. Abbiamo costruito quattro plasmidi di espressione mutanti dell'enzima mediante mutagenesi sito-diretta. Proteine ​​mutanti sono stati overexpressed in E. coli e purificato con una colonna di nichel metallico affinità. Studi cinetici di wild-type e mutante proteine ​​sono state effettuate, e il risultato ha confermato che His352 è un residuo catalitico di ratto mitocondriale 3 chetoacil-CoA tiolasi. Il nostro sovraespressione in E. coli e purificazione di uno stadio del altamente attiva ratto mitocondriale 3 chetoacil-CoA tiolasi Hollister Online Shop notevolmente facilitato il nostro approfondimento di questo enzima, e il nostro risultato di mutagenesi sito-specifica è aumentata la nostra comprensione del meccanismo di reazione catalizzata da tiolasi 3 chetoacil-CoA.
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